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果胶裂解酶(pectinate lyasesPL)试剂盒说明书

时间:2019-07-11 22:14  来源:未知  阅读次数: 复制分享 我要评论

  果胶裂解酶(pectinate lyases,PL)试剂盒仿单_生物学_天然科学_专业材料。测定意义: 果胶裂解酶(EC4.2.2.10)是果胶酶的主要构成部门,是一种能降解动物细胞壁,导致动物组织软化以至灭亡的解聚酶,来历比力普遍,次要来历于微生物,可用于果汁、果酒的澄清,提高生果出汁率,动物病毒的纯化,纸浆的漂白和纺织品的生物精辟,在削减情况污染和降低能源耗损方面具有潜在的使用价值。

  货号:MS2622 微量法 留意:正式测定之前选择 2-3 个预期差别大的样本做预测定。 规格:100 管/48 样 果胶裂解酶(pectinate lyases,PL)试剂盒仿单 测定意义: 果胶裂解酶(EC4.2.2.10)是果胶酶的主要构成部门,是一种能降解动物细胞壁,导致植 物组织软化以至灭亡的解聚酶, 来历比力普遍, 次要来历于微生物, 可用于果汁、 果酒的澄清, 提高生果出汁率,动物病毒的纯化,纸浆的漂白和纺织品的生物精辟,在削减情况污染和降低 能源耗损方面具有潜在的使用价值。 测定道理: 果胶裂解酶感化于果胶中的 α -1,4 糖苷键,生成在还原端 C4 和 C5 之间位置具有不饱和 键的不饱和寡聚半乳糖醛酸,在 235nm 处有特征接收峰。 自备尝试用品及仪器: 天平、低温离心计心情、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板) 、恒温水 浴锅。 试剂构成和配制: 提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保留。 试剂一:液体 6mL×1 瓶,4℃保留。 试剂二:液体 6mL×1 瓶,4℃保留。 试剂三:液体 6mL×1 瓶,4℃保留。 酶液提取: 1.组织:按照组织质量(g) :提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加 入 1mL 提取液) ,进行冰浴匀浆。10000g ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 2.细菌、线 个) :提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞插手 1mL 提取液) , 冰浴超声波破裂细胞 (功率 300w, 超声 3 秒, 间隔 7 秒, 总时间 3min) ; 然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。 3. 培育液:间接测定。 测定操作表: 1、分光光度计/酶标仪预热 30min,调理波长至 235nm,蒸馏水调零。 2、操作表 对看管 测定管 试剂一(μ L) 120 试剂二(μ L) 120 40℃温育 3min 酶液(μ L) 20 20 混匀,40℃反映 30min 试剂三(μ L) 60 60 混匀于微量石英比色皿/96 孔板 (UV 板) 测定 235nm 处吸光值 A, 第 1 页,共 3 页 △A=A 测定管-A 对看管。 酶活性计较公式: a. 用微量石英比色皿测定的计较公式如下 1. 组织中 PL 活性 (1)按照卵白浓度计较 酶活性定义:在 40℃,pH5.5 前提下,每毫克卵白每分钟分化果胶发生 1nmol 不饱和半乳糖醛 酸所需的酶量为一个酶活力单元。 PL 活性(nmol/min/mg prot)= △A÷(ε ×d)×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T = 64.1×△A÷Cpr (2)按照样素质量计较 酶活性定义:在 40℃,pH5.5 前提下,每克组织每分钟分化果胶发生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸 所需的酶量为一个酶活力单元。 PL 活性(nmol/min/g 鲜重)= △A÷(ε ×d)×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)÷T = 64.1×△A÷W 2. 细菌、真菌 PL 活性 酶活性定义:在 40℃,pH5.5 前提下,每 104 个细胞每分钟分化果胶发生 1nmol 不饱和半乳糖 醛酸所需的酶量为一个酶活力单元。 PL 活性(nmol/min/104cell)= △A ÷(ε ×d)×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总)÷T = 64.1×△A÷细胞数量 3. 培育液 PL 活性 酶活性定义:在 40℃,pH5.5 前提下,每毫升培育液每分钟分化果胶发生 1nmol 不饱和半乳糖 醛酸所需的酶量为一个酶活力单元。 PL 活性(nmol/min/mL)= △A÷(ε ×d)×V 反总÷V 样÷T = 64.1×△A ε :不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数:5200L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反映总 体积,0.2mL;V 样:反映系统中样本体积,0.02mL;V 样总:插手提取液体积,1mL;Cpr:样 本卵白浓度,mg/mL;W,样素质量,g;T:反映时间,30min b. 用 96 孔板测定的计较公式如下 1. 组织中 PL 活性 (1)按照卵白浓度计较 酶活性定义:在 40℃,pH5.5 前提下,每毫克卵白每分钟分化果胶发生 1nmol 不饱和半乳糖醛 酸所需的酶量为一个酶活力单元。 PL 活性(nmol/min/mg prot)= △A÷(ε ×d)×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T = 128.2×△A÷Cpr (2)按照样素质量计较 酶活性定义:在 40℃,pH5.5 前提下,每克组织每分钟分化果胶发生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸 所需的酶量为一个酶活力单元。 PL 活性(nmol/min/g 鲜重)= △A÷(ε ×d)×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)÷T = 128.2×△A÷W 2. 细菌、真菌 PL 活性 酶活性定义:在 40℃,pH5.5 前提下,每 104 个细胞每分钟分化果胶发生 1nmol 不饱和半乳糖 第 2 页,共 3 页 醛酸所需的酶量为一个酶活力单元。 PL 活性(nmol/min/104cell)=△A÷(ε ×d)×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总)÷T = 128.2×△A÷细胞数量 3. 培育液 PL 活性 酶活性定义:在 40℃,pH5.5 前提下,每毫升培育液每分钟分化果胶发生 1nmol 不饱和半乳糖 醛酸所需的酶量为一个酶活力单元。 PL 活性(nmol/min//mL)= △A÷(ε ×d)×V 反总÷V 样÷T = 128.2×△A ε :不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数:5200L/mol/cm;d:比色皿光径,0.5cm;V 反总:反映 总体积,0.2mL;V 样:反映系统中样本体积,0.02mL;V 样总:插手提取液体积,1mL;Cpr: 样本卵白浓度,mg/mL;W,样素质量,g;T:反映时间,30min 第 3 页,共 3 页

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